激光(guang)熒(ying)光(guang)共聚焦顯微鏡是在熒(ying)光(guang)顯微鏡的基礎上(shang)加裝(zhuang)激光(guang)掃(sao)描裝(zhuang)置，可(ke)(ke)(ke)以(yi)利(li)用可(ke)(ke)(ke)見光(guang)對熒(ying)光(guang)探針進行(xing)激發，再利(li)用計(ji)算機圖像(xiang)(xiang)處理技(ji)術(shu)獲得(de)細胞的圖像(xiang)(xiang)。激光(guang)熒(ying)光(guang)共聚焦顯微鏡不僅可(ke)(ke)(ke)以(yi)觀察固定的細胞、組織切(qie)片，還(huan)可(ke)(ke)(ke)以(yi)對活細胞的結構、分子、離子進行(xing)實時動態觀察和檢測。

一(yi).Z-STACK 三維構建

激光熒(ying)光共聚焦顯微鏡(jing)采用的(de)(de)是類(lei)似于(yu)連(lian)續斷(duan)層掃描的(de)(de)方法，即通過移動Z軸獲得一張(zhang)張(zhang)連(lian)續的(de)(de)光學(xue)切(qie)片，通過計算機可(ke)以(yi)將這些光學(xue)切(qie)片重(zhong)新(xin)組(zu)構建成一張(zhang)三維圖像(xiang)（可(ke)做單色或(huo)多色圖像(xiang)處(chu)理組(zu)合成細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)真實的(de)(de)三維結(jie)(jie)構）。通過旋轉，可(ke)觀(guan)察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)各個(ge)側面的(de)(de)表面形(xing)態，也可(ke)以(yi)從斷(duan)面觀(guan)察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)內部結(jie)(jie)構，測量細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)長寬高，體積，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)數量統計等功能。通過shadow功能，可(ke)以(yi)去除細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)上的(de)(de)陰影，突出(chu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)立體效果。LSCM的(de)(de)Z-STACK廣(guang)泛應用于(yu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)骨架，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)凋亡(wang)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)器(qi)等的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)結(jie)(jie)構分析中。

二. 細胞靜態結構檢測，原位鑒定細胞或組織內生物大分子觀察

1.檢測細(xi)胞凋亡

2.細胞原(yuan)位檢(jian)測核酸

細胞核定位及其形態學觀察，檢測細胞內DNA的復制及斷裂情況以及染色體定位觀察

3.細(xi)胞器觀察(cha)及(ji)測(ce)定

4.觀察細胞骨架結(jie)構

5.檢測細胞內脂肪

6.檢測細胞融合

三.動態觀察

1.實時定(ding)量(liang)測定(ding)細胞內鈣的變化

2.測定細胞內PH的變化

激光共聚焦顯微鏡是測量若干種離子濃度并顯示其分布的有效工具，對焦點信息的有效辨別使在亞細胞水平顯示離子分布成為可能。利用熒光探針，可測量單個細胞內PH和多種離子（Ca+，K+，Na+，Mg2+）在活細胞內的濃度及變化。一般來說，電生理記錄裝置加攝像技術可以快速檢測細胞內離子量變化，激光共聚焦技術可以提供更好的亞細胞結構中Ca+濃度的動態變化圖像，對研究Ca+細胞內動力學有意義。

3.檢(jian)測膜電位的(de)變化

JC-1 低電位下單體存在，發綠色的熒光，高電位下J-聚集體發紅色的熒光，隨電位增加，紅色熒光也增加。

4.檢(jian)測細(xi)胞內活性氧物種(zhong)的產生(sheng)

5.藥物(wu)篩選(xuan)

對(dui)藥(yao)物，病毒，細菌等進(jin)行(xing)熒光(guang)標記，當檢測藥(yao)物跨膜進(jin)入組(zu)織或細胞中時，可檢測藥(yao)物是否進(jin)入，位(wei)置(zhi)含量以及動(dong)態過程(cheng)。

6.細胞間的通訊研究

激光共聚焦顯(xian)微鏡可(ke)(ke)通過(guo)觀察細(xi)胞縫隙(xi)連接(jie)分(fen)子的轉移來測(ce)量(liang)傳遞細(xi)胞調控信(xin)息的一些離子，小分(fen)子物質(zhi)。該技術可(ke)(ke)以(yi)用于研究胚胎發育(yu)，生(sheng)殖發育(yu)，神經生(sheng)物學，腫瘤發生(sheng)等過(guo)程中(zhong)縫隙(xi)連接(jie)通訊的基本(ben)機制和作用，也可(ke)(ke)以(yi)用于鑒別(bie)對縫隙(xi)連接(jie)作用有潛(qian)在毒(du)性的化學物質(zhi)。

7.觀察細胞遷移和生長

LSCM已經極大地(di)提高(gao)了光(guang)子產(chan)生效率(lv)，樣品(pin)可(ke)以與(yu)更小(xiao)(xiao)毒性的染料(liao)結合減少每次掃描時激光(guang)束對細胞的損傷，可(ke)用于(yu)數小(xiao)(xiao)時的長(chang)時程定(ding)時掃描，記錄細胞遷移和生長(chang)等細胞生物學現(xian)象。

8.檢測(ce)熒光(guang)漂白的恢復(fu)

當一個細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內(nei)(nei)的(de)(de)熒(ying)光分子被(bei)激光漂(piao)(piao)白(bai)或淬(cui)滅(mie)失去發光能力，臨近(jin)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中未被(bei)淬(cui)滅(mie)的(de)(de)熒(ying)光分子可以(yi)通(tong)過細(xi)(xi)胞(bao)(bao)間(jian)的(de)(de)縫隙擴散到已經被(bei)漂(piao)(piao)白(bai)的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中，從而恢復熒(ying)光。該(gai)技術可用(yong)于(yu)分析分析細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內(nei)(nei)蛋白(bai)質運輸，受體在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜上(shang)的(de)(de)流動和大分子組裝等細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)物學(xue)過程。